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LC液相色譜儀的要求指導(dǎo)分享說明

更新時(shí)間:2017-11-25      點(diǎn)擊次數(shù):2201
     LC液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運(yùn)動時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,LC液相色譜儀被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
    LC液相色譜儀的要求
    1、流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細(xì)的膜過濾)。
    2、流動相過濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。
    3、不能用純乙腈作為流動相,這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。
    4、使用緩沖溶液時(shí),做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
    5、長時(shí)間不用儀器,應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機(jī)相(如,甲醇等),因?yàn)?,純水易長霉。
    6、LC液相色譜儀每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
    7、C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
    8、堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗,清洗方法:
    ①以異丙醇作溶劑沖洗;
    ②放在異丙醇中間用超聲波清洗;
    ③用10%稀硝酸清洗;
    9、氣泡會致使壓力不穩(wěn),重現(xiàn)性差,所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
    10、如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時(shí),LC液相色譜儀要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動相的清洗。
    11、要注意柱子的pH值范圍,不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品,特別是堿性樣品。
    12、更換流動相時(shí)應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗,然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時(shí)要用異丙醇過渡一下。
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